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利用斑馬魚模型評價細胞凋亡

【評價原理】

細胞都有一個固定死亡的程序,細胞凋亡通過去除潛在的損傷細胞和分化后多余的細胞來保護機體,在脊椎動物中尤為重要。在斑馬魚DNA數據庫中已鑒定出許多與哺乳動物同一家族的凋亡相關基因。這暗示了大部分凋亡通路在斑馬魚與高等脊椎動物的進化上有很高的保守性,因此,在凋亡的研究領域上,斑馬魚被認為是一種有效的實驗動物模型。

吖啶橙(AO)能透過胞膜完整的細胞,嵌入細胞核DNA,使之發出明亮的綠色熒光。凋亡的細胞呈現為染色增強,熒光更為明亮,均勻一致的圓狀或固縮狀、團塊狀結構。

基因組DNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶的催化下加上熒光素 (FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測。

用兩種不同的特異性熒光染色,均可以在熒光顯微鏡下觀察到凋亡細胞。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成兩組,分別是正常對照組和供試品組。供試品通過服用的方式攝入到斑馬魚體內(供試品通過溶解到養魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內)。

服用一段時間供試品后,我們分別對斑馬魚整體做兩種凋亡細胞特異性染色,用熒光顯微鏡觀察細胞凋亡。

【結果展示】

可以看到,供試品組的凋亡細胞熒光強度與正常對照組比較明顯增強。

【評價結論】

1.經過每組30尾斑馬魚的對比實驗,供試品組斑馬魚出現凋亡細胞熒光強度比正常對照組明顯增強。

2.本實驗證實了供試品誘發斑馬魚細胞凋亡。

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